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重组卵白抒发纯化

德泰生物努力于为客户供给高纯度、低本钱的活性重组卵白,包含各种受体、细胞因子、发展因子、转录因子、激素、酶、毒性卵白、病毒抗原等,知足客户下流科研尝试研讨的须要。德泰具有进步前辈的卵白抒发手艺及丰硕的卵白抒发经历,实现了多种一般前提下不抒发、难抒发、抒发量低的卵白的制备。

迄今为止,德泰共托付3000+组重组卵白(各种野生型卵白及渐变型卵白)。托付的卵白被用于抗体制备、ELISA、IHC、药物研讨、植物尝试、晶体布局阐发、体外酶活测定、细胞尝试等下流尝试。

为甚么挑选咱们?

  • 高胜利率:自建尝试室,自立研发多项尝试手艺,尝试胜利率大于98%,托付的近千组卵白已胜利操纵于抗原出产,抗体药研发,诊断试剂,疫苗研讨等范畴
  • 不胜利不免费:可溶性原核抒发,卵白抒发不胜利不免费;哺乳植物细胞抒发,活性更高,几十种细胞转染经历,重组抗体抒发,不胜利不免费
  • 高纯度卵白:四大卵白纯化方式,连系AKTA卵白纯化体系,可定制高纯度卵白(>95%),操纵于酶制剂,晶体布局阐发,生物活性尝试等
  • 一站式办事:只要供给基因序列,德泰实现载体构建,卵白抒发,卵白纯化(内毒素去除/RNA酶去除),抗体制备,彼此感化阐发等一站式办事。德泰卵白抒发手艺平台  

    卵白抒发手艺平台举措措施

重组卵白抒发体系

重组卵白有良多的操纵,包含抗原制备,卵白彼此感化,酶学阐发,及药物靶点研讨。挑选适合的卵白抒发体系,对下流卵白的操纵有主要影响。卵白功效,产率,本钱是优先斟酌的几个身分。德泰为您供给多个重组卵白抒发体系,知足您的差别须要。


供给多种重组质粒和转化宿主菌株,优化温度、IPTG浓度、培育时候等抒发前提,按照最高产量参数组合停止缩小。

合用于抒发原核卵白,简略的真核卵白和同位素标记卵白等。

自建细胞房,自立研发高抒发载体,十几年细胞培育,几十种细胞转染经历,疾速托付毫克或产业级卵白,不胜利不免费。

合用抒发排泄卵白,跨膜卵白,酶类,离子通道等,卵白布局靠近自然状况,活性更高。

拟定矫捷的抒发载体构建计划,优化挑选排泄型抒发载体(pPIC9、pHIL-S1、pPICZa)与宿主菌株,包含Mut+、Muts。

合用于抒发真核卵白、排泄卵白、某些胞质定位且无糖基化润色卵白等。
虫豸抒发体系

虫豸抒发体系
(Insect)


按照卵白性子挑选胞内抒发或排泄抒发,挑选高效融会载体与抒发细胞,肯定最优抒发量的最好抒发前提。

合用于抒发高档真核生物卵白、排泄卵白、多元卵白复合物等。

重组抒发案例

案例一

案例概略:抒发的目标卵白份子量在10kD摆布,操纵大肠杆菌抒发体系停止抒发。尝试的难点为卵白须要无标签抒发纯化,纯化难度较大;同时因为下流操纵的特别性,须要去除卵白质中的DNA。

目标卵白纯化图
DNA检测成果

Fig1 :目标卵白纯化图
Fig2:DNA检测成果

德泰经由过程查阅大批文献及屡次纯化前提试探,终究胜利纯化获得目标卵白,纯度>90%。经琼脂糖凝胶电泳检测,无DNA残留。

案例二

案例概略:该案例中目标卵白为聚体卵白(卵白的活性布局以四聚体情势存在),客户接纳哺乳植物瞬转的方式抒发该卵白,在抒发时碰到了转染效力低、卵白抒发程度低,细胞培育上清中没法检测到四聚体等题目。在尝试失利后,客户找到德泰生物。
公司接办该名目以后,对基因序列、抒发载体与宿主细胞停止优化,进步卵白抒发程度。同时对转染方式停止优化,优化后转染效力较着进步。

转染方式优化前与优化后转染效力对照

Fig3:转染方式优化前(左)与优化后(右)转染效力对照

接纳亲和纯化的方式停止目标卵白的纯化,层析过柱以后,在复原和非复原状况下别离对上洗濯脱组分停止电泳,证明细胞培育上清中确切存在该聚体卵白。终究经由过程亲和纯化,胜利纯化获得该聚体卵白。

复原状况与非复原状况上洗濯脱组分电泳图

Fig4:复原状况(lane 3)与非复原状况(lane 4)上洗濯脱组分电泳图

附录:重组卵白抒发体系对照表

特色 大肠杆菌 酵母 虫豸细胞 哺乳植物细胞
出产周期 4~6周 ~9周 ~9周 7~9周
价钱 + ++ +++ +++
抒发程度 高(>50%) 低-高(>10%) 低-高(>20%) 低-高(>30%)
卵白质折叠 局部折叠 不完整准确折叠 准确折叠 准确折叠
范围化出产 +++ ++ ++ ++
翻译后润色 磷酸化
乙酰化
酰胺化
γ-羧基
糖基化

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