德泰生物供给哺乳植物不变细胞系构建办事,与刹时转染差别,不变细胞系构建是指外源基因进入受体细胞并整合到细胞的染色体上,使宿主细胞可持久抒发目标基因,不变细胞株抒发的卵白/抗体不变性更好和批次差别性更小。
咱们的稳转细胞株挑选培育的是CHO细胞,针对咱们自立研发的高抒发proEM体系定向驯化的pro-CHO细胞,在重组卵白出产进程中表现出很高的产能和细胞密度。pro-CHO还可以或许或许或许或许根据客户特别的培育基成份停止驯化。pro-CHO展现出色的发展代谢特色,不论是在摇瓶,仍是在wave或细胞罐中,其微弱的发展曲线为卵白高产奠基了坚固的根本。
名目 | 办事内容 | 不变细胞系 构建周期 | 终究托付 | 价钱 |
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基因分解&亚克隆 | 暗码子优化&基因分解 | ~4周 | 抒发载体; 测序报告; 1株稳转细胞株(2管/株,1×107cells/ml); |
询价 |
载体构建&质粒制备 | ||||
细胞转染 | 细胞转染 | ~4周 | ||
抒发检测(WB或ELISA) | ||||
不变细胞系构建 | 压力挑选 | ~2月 | ||
稳转细胞株挑选 | ||||
卵白出产 | ||||
细胞冻存 |
检查全文:稳转株挑选道理体例
操纵哺乳植物体系出产卵白的体例有两种:刹时转染和稳转株挑选。经由进程不变细胞系构建挑选不变抒发细胞株。针对刹时转染,外源基因在短时候转录翻译取得的卵白量较少,可以或许或许或许或许知足小量卵白制备,大批出产本钱很高。绝对此,不变转染的是将外源基因整合到细胞本身的基因组上,跟着细胞的发展割裂外源基因可以或许或许或许或许不变转染抒发,同时颠末抗生素加压挑选,终究取得可以或许或许或许或许不变转染抒发卵白的细胞株,稳转株出产卵白不变性更好,批次差别性更小。
如图,目标基因(红)转染至宿主细胞,经由进程必然的细胞转染体例,可以或许或许或许或许取得两种成果。成果A:目标基因整合到了宿主本身的基因组上,此为不变转染,跟着细胞的发展复制,目标基因可以或许或许或许或许不变存在并抒发,是以不变转染的细胞可以或许或许或许或许胜利构建并挑选稳转细胞株。
B是目标基因被转染到了宿主菌内,可是未整合到宿主本身基因组上,此为刹时转染,目标基因只能短时候疾速抒发,跟着细胞的不时发展割裂,目标基因终究丧失。
细胞转染体例 | 细胞转染道理 | 首要特色 | 首要特色 |
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阳离子脂质体转染法 | 带正电荷的脂质体靠静电感化和DNA连系构成DNA-脂质体复合物,而后经由进程细胞的内吞感化进入细胞 | a)操纵简洁 b)合用于各类袒露的DNA和RNA片断 c)合适转染各类的细胞 d)对DNA浓度有必然请求 e)对细胞有必然的毒性 |
刹时转染 不变转染 一切细胞 |
磷酸钙法 | 磷酸钙可以或许或许或许或许增进外源DNA和细胞的连系,磷酸钙-DNA复合物可以或许或许或许或许附着到细胞外表,并经由进程内吞感化进入细胞 | a)操纵简略 b)对DNA浓度请求高 c)合用性有范围(不合用于原代细胞) |
刹时转染 不变转染 |
电穿孔法 | 高脉冲的电压粉碎细胞膜,在细胞膜外表构成孔道,DNA经由进程孔道进入细胞 | a)合用性广,合用于质粒和几十kb的基因组片断 b)针对差别细胞要优化尝试前提 c)细胞致死率较高 |
刹时转染 不变转染 一切细胞 |
细胞苏醒是将保管在液氮或-80℃冰箱中的细胞株冻结并从头培育的进程。细胞苏醒的关头是快复,避免在冻结进程中,发生的水珠构成冰晶毁伤细胞。细胞苏醒普通步骤以下:
细胞苏醒后,发展一段时候,95%的细胞贴壁发展,细胞状况杰出,申明细胞苏醒胜利。
以脂质体转染为例的操纵流程。
24-72h插手挑选性抗生素停止稳转株挑选,预尝试肯定抗生素的最好浓度,肯定抗生素对所选细胞的最低感化浓度。
检查全文:稳转细胞株挑选尝试流程
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