Tryptone 7.2g,yeast 14.4g,甘油3g,磷酸氢二钾9.86g,磷酸二氢钾1.4g,去离子水搅拌消融,定容至600ml(可分装成两瓶利用),其他量顺次缩小;
Tryptone 1g,yeast 6g,氯化钠1g,去离子水消融搅拌,定容至100ml;其他量顺次缩小;
固体LB培育基,按照1.5%的量插手琼脂
Tryptone 9.6g,yeast 6g,氯化钠3g,去离子水搅拌消融后定容至600ml;其他量顺次缩小;
在80ml的去离子水中插手2g琼脂糖,120度灭菌20min,温度降落60℃以后,超净台插手10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L);
在90ml的去离子水中插手2g琼脂糖(20g/L),120度灭菌20min,温度降落60℃以后,超净台插手10ml 10xYNB(13.4g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),0.5ml甲醇(0.5%);
134gYNB固体溶于1L的去离子水中,过滤灭菌,4℃保管;
Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,葡萄糖20g/L,固体培育基增加1.5%的琼脂;
山梨醇186g/L,琼脂糖20g/L,120度灭菌20min,温度降落60℃以后,超净台插手10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),100xAA 1ml,搅拌混匀,倒平板(设置装备摆设100ml灭菌时插手80ml水便可);
精确称取L-谷氨酸,L-亮氨酸,L-异亮氨酸,L-赖氨酸,L-甲硫氨酸各500g溶于100ml去离子水中,过滤灭菌,4℃保管;
Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氢二钾3g/L,磷酸二氢钾11.8g/L,加水至890ml,120度灭菌20min,温度降落60℃以后,超净台插手10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甘油10ml;
Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氢二钾3g/L,磷酸二氢钾11.8g/L,加水至895ml,120度灭菌20min,温度降落60℃以后,超净台插手10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甲醇5ml;
生物素20mg/100ml去离子水,过滤灭菌,4℃保管;
NH4H2PO4 50g/L,CaSO4 0.93g/L,K2SO4 18.2g/L,MgSO4·7H2O 14.9g/L,KOH3g/L,葡萄糖50g/L,磷酸二氢钾5g/L;
上述培育基YNB,甲醇,生物素,氨基酸过滤除菌,葡萄糖108℃灭菌30min,其他120℃高压灭菌20min;
A液:丙烯酰胺29.2g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,去离子水搅拌消融,定容至100ml;
B液:Tris 18.2g,加800ml去离子水,调pH至8.8,插手4ml 10% SDS,定容至100ml;
C液:Tris 6.05g,加30ml的去离子水,调pH至6.8,插手2ml 10% SDS,定容至50ml;
D液:10% SDS
AP:10%过硫酸铵:5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中;现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。
TEMED:TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,高温保管。
差别浓度的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分手胶设置装备摆设
溶液成份 | 差别体积的凝胶各成份的体积(ml) | |||||||
6 % | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | 40 | 50 |
水 | 2.6 | 5.3 | 7.9 | 10.6 | 13.2 | 15.9 | 21.2 | 26.5 |
30% A液 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 8 | 10 |
1.5mol/L Tris(pH8.8) | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5 | 6.3 | 7.5 | 10 | 12.5 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
10% AP | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
TEMED | 0.004 | 0.008 | 0.012 | 0.016 | 0.02 | 0.024 | 0.032 | 0.04 |
12% | ||||||||
水 | 1.6 | 3.3 | 4.9 | 6.6 | 8.2 | 9.9 | 13.2 | 16.5 |
>30% A液 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 16 | >20 |
1.5mol/L Tris(pH8.8) | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5 | 6.3 | 7.5 | 10 | 12.5 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
10% AP | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 | 0.016 | 0.02 |
15 % | ||||||||
水 | 1.1 | 2.3 | 3.4 | 4.6 | 5.7 | 6.9 | 9.2 | 11.5 |
30% A液 | 2.5 | 5 | 3.8 | 5 | 6.3 | 7.5 | 10 | 12.5 |
1.5mol/L Tris(pH8.8) | 1.3 | 2.5 | 3.8 | 5 | 6.3 | 7.5 | 10 | 12.5 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
10% AP | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 | 0.012 | 0.016 | 0.02 |
按照要分手的样品(DNA)巨细配制适合浓度的琼脂糖凝胶。精确称取必然量的琼脂糖干粉,插手到适合体积的锥形瓶中,插手必然量的电泳缓冲液(30ml摆布TAE);放入到微波炉内加热熔化,冷却半晌(不烫手便可);熔化后的琼脂溶液摇摆混匀,倒入电泳槽中,等其凝结;室温下凝结30-40min摆布,谨慎的拔出梳子,掏出凝结好的凝胶4℃保管;
配制1L,在1L烧杯中精确称取Tris3.0g,甘氨酸14.4g,SDS1.0g,,去离子水搅拌消融,定容至1L;
配制1L,在1L烧杯中精确称取Tris5.8g,甘氨酸2.9g,SDS0.37g,甲醇200ml,插手去离子水搅拌消融,定容至1L;
① 5xLoading buffer
配制50ml,在1L的烧杯中,精确称取Tris 0.9g,甘油32.5g,SDS 5g,DTT2.75g,溴酚蓝0.125g,插手适当去离子水搅拌消融,定容至50ml;
② 2xLoading buffer
配制50ml,在1L的烧杯中,精确称取60mM Tris 0.36g,20%甘油13g,4% SDS 2.0g,150mM DTT 1.10g,
0.1%溴酚蓝0.05g,插手适当去离子水搅拌消融,定容至50ml;
R250(1L):在适合体积的烧杯中,精确称取R2501.0g,甲醇450ml,乙酸100ml,充实的消融。
1L:冰乙酸100ml,甲醇100ml,充实混匀,室温安排;
500ml 1XPBS,在适合体积的烧杯中,精确称取140mM氯化钠4.1g,2.7mM氯化钾0.1g,10mM NaH2PO4·12H2O 1.79g,1.8mM磷酸二氢钾 0.122g,用480摆布ml去离子水搅拌消融,调pH为7.4,定容至500ml;
设置装备摆设500ml1XTAE ,筹办适合体积的烧杯,精确称取Tris 2.42g,乙酸0.571ml,EDTA(Na)0.186g,插手去离子水搅拌消融,定容至500ml;